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    液相色譜分析柱常用問(wèn)題解答

    更新時(shí)間:2015-07-07        閱讀:2224
       液相色譜分析柱使用性非常高,與此同時(shí)遇到的問(wèn)題也會(huì)很多,不熟悉的客戶常常不知所措,小編根據(jù)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)了常見(jiàn)的問(wèn)題及解答,希望可以幫助到客戶。

      1、測(cè)定多肽,一般采用什么液相色譜分析柱?流動(dòng)相是乙腈和水,還有微量的TFA。特別是像類似三肽的短肽,應(yīng)該怎么選擇液相色譜分析柱?

      答:分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測(cè)定,也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的。

      2、氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí),很傷液相色譜分析柱,如使用一段時(shí)間后,柱效降低,峰形改變,如何恢復(fù)?

      答:氨基柱測(cè)酸性樣品,應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化,導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降。建議:用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1%。

      3、液相色譜分析柱的技術(shù)都有哪些?比如封尾等,這些技術(shù)在應(yīng)用時(shí)都體現(xiàn)在哪里?

      答:色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),填料技術(shù)自不待言,填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒(méi)有想象中的這么簡(jiǎn)單,不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長(zhǎng)度,裝柱工藝都有所不同,要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床,更多是一門藝術(shù),需要經(jīng)驗(yàn)積累。

      國(guó)內(nèi)和國(guó)外想比,我認(rèn)為色譜柱的差距在于:國(guó)內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開(kāi)發(fā)填料,一般買國(guó)外現(xiàn)成填料裝柱,買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。另外因?yàn)檠b柱歷史短,經(jīng)驗(yàn)積累少,裝柱工藝也沒(méi)有*達(dá)到國(guó)外水平。另外,對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠,國(guó)產(chǎn)的還不過(guò)關(guān),在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國(guó)外產(chǎn)品相比,差距很大。

      4、液相色譜分析柱在什么情況下可以清洗一下篩板呢?原來(lái)也討論過(guò)這個(gè)問(wèn)題,我也拆下來(lái)清洗過(guò),但我看到柱前段的污染更甚,于是就用刀片刮了刮,然后把清洗好的篩板安裝上去。問(wèn)題解決了,但使用壽命會(huì)不會(huì)減少呢?

      答:液相色譜分析柱柱頭污染了,就取出污染的,再裝一些填料。因?yàn)榧尤肽愎瘟诵┨盍希敲次⒂^的塔板數(shù)就少了。假入你刮得不多,僅表面,可能就是一些臟物,所以問(wèn)題解決。但是今后還會(huì)有同樣問(wèn)題,再掛,那么不小心刮,影響柱效。建議還是裝一個(gè)預(yù)柱。

      5、如果液相色譜分析柱取下來(lái)放置一段時(shí)間,需要做什么保護(hù)嗎?

      答:對(duì)一般的反相柱,也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵頭塞緊柱兩頭,以免保存溶劑揮發(fā),應(yīng)該不需要做特殊的保護(hù)。

      6、網(wǎng)上對(duì)液相色譜分析柱是否可以反沖一直有爭(zhēng)論,那什么樣的柱子可以反沖,什么不可以。反沖后是正者用,還是反著用。具體到各型號(hào)柱子不僅是ODS柱,其他如正向柱、氨基柱、離子交換柱等都有解釋。

      答:一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖,只有兩端篩板孔徑不對(duì)稱的柱子不能反沖,不過(guò)目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見(jiàn)了。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉,反沖后還是正著用比較好,以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是:正向使用,反向沖洗。

      7、流動(dòng)相中加入適量的四氫呋喃可以改善峰形的機(jī)理是什么?

      答:《液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說(shuō):甲醇為質(zhì)子給予體、乙腈為質(zhì)子接受體、四氫呋喃是偶極溶劑,應(yīng)該除了極性影響,還有另外的影響因素,至于分離機(jī)理,還是比較復(fù)雜的,不能看成是個(gè)方法。

      8、預(yù)柱或保護(hù)柱用還是不用的問(wèn)題!原來(lái)分析中藥品種時(shí),我一直都是用保護(hù)柱。但來(lái)到新公司后,發(fā)現(xiàn)大家都沒(méi)有使用,幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室連保護(hù)柱都沒(méi)找到一個(gè),也就是說(shuō)大家從來(lái)都沒(méi)有用過(guò)。后來(lái)問(wèn)一個(gè)老員工,說(shuō)是有可能影響藥品分析。我就想問(wèn):安裝保護(hù)柱后會(huì)影響樣品分析嗎?我們做的大多是頭孢類的抗生素。

      答:應(yīng)該這樣說(shuō),加上保護(hù)柱,肯定有利于保護(hù)色譜柱不受一些顆粒物質(zhì)的堵塞,肯定有害于分離度和柱效,因?yàn)楸Wo(hù)柱中間有著死體積的存在。但是如果保護(hù)柱接得好,并且盡量控制其匹配性和經(jīng)常更換,分離度和柱效應(yīng)該影響并不大。

      頭孢類的抗生素也要看到底是原料藥還是制劑嘍,有些原料藥,可以根據(jù)液相色譜分析柱的損耗選擇添加預(yù)柱(中間是個(gè)篩板),制劑的話,如果有輔料嚴(yán)重干擾或者流動(dòng)相鹽分比較大,那還是配個(gè)保護(hù)柱。

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